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如何核算c18反相色譜柱的柱效率?

更新時(shí)間:2023-01-06      點(diǎn)擊次數(shù):1020
  c18反相色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。
  長(zhǎng)度的選擇:柱越長(zhǎng),總柱效越高(n值越大),柱越長(zhǎng),分析時(shí)間也越長(zhǎng)。250—300mm是普遍的柱長(zhǎng),實(shí)驗(yàn)室一半以上的工作都是采用此規(guī)格柱子,一般用來(lái)分離l0到50個(gè)組份的中等至復(fù)雜混合物;500—600mm,要求較高分辨率的應(yīng)用,—般用來(lái)分離大于50個(gè)組份或包含有難分離物質(zhì)的復(fù)雜樣品程序升溫分析。
  c18反相色譜柱的柱效率與柱半徑平方成反比,內(nèi)徑越小柱效越高,但內(nèi)徑越大,柱容量也增加,允許進(jìn)樣量就越多。當(dāng)進(jìn)樣量超過(guò)柱容量時(shí),則因柱內(nèi)每塊理論板內(nèi)不能建立真正的平衡,將會(huì)導(dǎo)致色譜蜂畸變,柱分辨率降低,重現(xiàn)性不好。
  因此對(duì)于復(fù)雜樣品需要精確分離,必須使用小內(nèi)徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物,為了增加樣品容量就必須使用內(nèi)徑大的柱子,目前實(shí)驗(yàn)室使用最常見(jiàn)的柱子內(nèi)徑一般是4.6mm。
  c18反相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序,可能還有一些運(yùn)氣。一般使用高壓勻漿方法裝填,也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實(shí),這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體,和合適的壓力。壓力太大,顆粒破碎,壓力太小,塔板數(shù)少。同時(shí)壓力需要穩(wěn)定,不然分布不均,拖尾嚴(yán)重。同時(shí)還有頭上平整程度。套上套,就可以用了。