在液相色譜上遇到的問(wèn)題有很多，例如HPLC 色譜柱的一些常見(jiàn)問(wèn)題時(shí)有出現(xiàn)，可能會(huì)令很多實(shí)驗(yàn)員感到非常沮喪。那么今天，恒譜生帶您了解這些是什么以及如何解決它們可以讓您避免數(shù)小時(shí)的挫敗感。

一、無(wú)峰值：

       可能有多種因素會(huì)導(dǎo)致 HPLC 輸出中不出現(xiàn)峰或出現(xiàn)非常小的峰。正常讀數(shù)應(yīng)該又大又細(xì)的峰值，高度也是會(huì)有不一樣的。小峰或沒(méi)峰可能代表檢測(cè)器燈已關(guān)閉，沒(méi)有流動(dòng)相流量和樣品丟失或變質(zhì)，或者檢測(cè)器、積分器、進(jìn)樣器閥或記錄器這些有問(wèn)題存在。

     其實(shí)先要確保探測(cè)器是打開(kāi)狀態(tài)，然后檢查所有連接情況。確保自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中有足夠的液體和樣品中無(wú)氣泡情況出現(xiàn)，并使用新的標(biāo)液重新進(jìn)行系統(tǒng)的檢查。

二、無(wú)流量：

       如果沒(méi)有出峰，很有可能是HPLC 色譜柱中沒(méi)有流量；也可能意味著泵已關(guān)閉或流量因某種原因中斷或受阻；同時(shí)泵頭中也可能存在泄漏或空氣滯留。

       如果泵關(guān)閉，需要啟動(dòng)泵并檢查儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相液位和整個(gè)系統(tǒng)的流量情況。檢查樣品環(huán)是否有其他障礙物或氣塞，并確保流動(dòng)相組分可混溶且流動(dòng)相是否能夠進(jìn)行正常脫氣。繼續(xù)檢查系統(tǒng)松動(dòng)情況，檢查泵是否有泄漏等其他問(wèn)題。

三、壓力問(wèn)題：

      要是壓力低于平常或無(wú)壓力這有可能是系統(tǒng)某處發(fā)生泄漏或空氣滯留；要是系統(tǒng)壓力過(guò)高，那么泵、進(jìn)樣器、在線(xiàn)過(guò)濾器、保護(hù)柱、分析柱或管路都可能有問(wèn)題。

      如果是檢查發(fā)現(xiàn)是低壓，那就要檢查整個(gè)色譜系統(tǒng)是否存在泄漏、泵密封件故障或閥門(mén)損壞的情況等。如果是高壓的話(huà)，先從移除保護(hù)柱和分析柱，并用接頭替換，將進(jìn)樣器重新連接到檢測(cè)器。以 2-5 mL/min 的速度運(yùn)行泵，并開(kāi)始查找原因，。如果問(wèn)題是出現(xiàn)在分析柱上，請(qǐng)?jiān)诜治鲋c檢測(cè)器斷開(kāi)連接時(shí)反轉(zhuǎn)，并沖洗色譜分析柱；在必要的時(shí)候更換入口濾芯或更換柱子。

四、裂峰：

       如果發(fā)現(xiàn)峰出現(xiàn)在中間下降形成M形，那么可能是分析柱入口可能存在一些污染；也可能在色譜柱入口處有篩板被堵塞了或存在了不均勻的空隙；還有可能是樣品溶劑與流動(dòng)相不相容。

       如果是入口處有污染，請(qǐng)反轉(zhuǎn)并沖洗色譜柱，并在需要時(shí)更換篩板。還可以用具有相同鍵合相功能的薄膜顆粒重新填充色譜柱頂部，并繼續(xù)以反向流動(dòng)方向使用色譜柱；如果是問(wèn)題出在樣品上，請(qǐng)調(diào)整流動(dòng)相中的樣品，因?yàn)闃悠泛土鲃?dòng)相中的 pH 值差異會(huì)導(dǎo)致分峰。

五、尾峰和前峰：

       發(fā)現(xiàn)峰不是直線(xiàn)上升和下降，而是開(kāi)始在前面或后面就形成輕微的傾斜，則稱(chēng)為前端或尾部。這通?？赡苁潜Ｗo(hù)柱或分析柱受損或是色譜柱過(guò)載。如果有拖尾峰，請(qǐng)先移除保護(hù)柱并嘗試分析，必要時(shí)就需要更換。如果需要恢復(fù)或更換分析柱。一定要檢查流動(dòng)相的組成和色譜柱的性能。有前峰的話(huà)，請(qǐng)嘗試注入更小的體積或稀釋樣品；如果溶劑有問(wèn)題請(qǐng)調(diào)整溶劑，并使用 50 柱體積的 HPLC 級(jí)乙酸乙酯以標(biāo)準(zhǔn)流速的兩倍或三倍沖洗極性鍵合相柱，然后在開(kāi)始分析之前使用中等極性溶劑。

       今天恒譜生分享的知識(shí)先到這啦，希望對(duì)您的工作有所幫助！